是利用基因同源重组，将外源有功能基因（基因组原先不存在、或已失活的基因），转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组，插入到基因组中，在细胞内获得表达的技术。
基因敲入（gene knock in）是利用基因同源重组，将外源有功能基因（基因组原先不存在、或已失活的基因），转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组，插入到基因组中，在细胞内获得表达的技术。基因敲入有两种，一种是原位敲入,即在原基因敲除的位点插入新基因,它是基因敲除的逆过程；另一种是定点敲入,即无论敲除基因的位点在哪里,敲入的基因是在特定启动子下，以转移载体的形式转座进去,所以插入的位点是一定的。